بیش بیان و تخلیص نانوبادی های نوترکیب و تهیه آنتی بادی ثانویه کونژوگه علیه آنها

هدف: قطعه متصل شونده به آنتی ژن از آنتی بادی های زنجیره سنگین شتری به صورت یک تک دومن(vhh )می باشند. ساختار کریستالی یک vhh خالص نشان داده است که این مولکول در حدود5/2 نانومتر قطر و کمتر از 4 نانومتر طول دارد. به همین علت به این مولکول نانوبادی گفته می شود. شباهت زیاد این مولکولها به vh انسانی موجب می شود که این مولکول کاربرد بالقوه در تشخیصهای ایمنی و نیز ایمنی درمانی داشته باشد. یکی از مواد مورد نیاز کلیدی در تولید و تعیین خصوصیات نانوبادی ونیز کاربرد نانوبادیها در تشخیص، مولکول آنتی نانوبادی کونژوگه به hrp می باشد. مواد و روشها: در این تحقیق بیان بالا و تخلیص چند نانوبادی ویژه تومورمارکرها انجام شد. به منظور بیان بالا، ژنهای نانوبادی در وکتور psjf9 ساب کلون شدند، که در نتیجه قطعه نانوبادی به صورت ادغام شده با چند دنباله نشانگر در باکتری e coliنوعtg1 بیان می شود. نانوبادیهای بیان شده با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص شدند. در اینجا تهیه، تخلیص و تعیین خصوصیات آنتی بادی علیه نانوبادیها که به صورت متصل به hrpمیباشد، توضیح داده شده است. نتیجه: آنالیز با sds-page و وسترن بلات نشان می دهد که نانوبادیهای تخلیص شده خالص و بدون شکستگی می باشد. بعلت استفاده از روشهای خاص بیوشیمی آنتی بادی کونژوگه به hrp تولید شده در این تحقیق، حساسیت و ویژگی مناسبی دارد. آنتی بادی کونژوگه تولید شده قابل استفاده در سیستمهای تشخیص نانوبادی است. بحث:در اینجا با تنظیم کردن دما و زمان و القا کننده، میزان قابل توجهی (در مقایسه با مطالعات مشابه) از ملکول نو ترکیب بیان وسپس تخلیص شده است و در فاز دوم با تولید آنتی بادی علیه آن و کونژوگاسیون به مولکول آنزیمی نشان دادیم مولکول حاصل قابلیت تشخیص نانوبادیها را در انواع روشهای تشخیصی با دقت و حساسیت بالا دارد.